Trabajo final para obtención de título: Bioquímico/a

La resistencia a los antimicrobianos es una problemática de salud pública a nivel mundial. Por ello, la OMS fomenta la investigación y el desarrollo de nuevos antimicrobianos a partir de plantas utilizadas en la medicina tradicional que presenten propiedades antimicrobianas. Ilex paraguariensis
St. Hil. (yerba mate) es un arbusto autóctono de la selva misionera con gran interés económico y cultural.Diversos estudios reportan que I. paraguariensis St. Hil. presenta demostrada actividad antimicrobiana frente a bacterias gram positivas y gram negativas; también reportan actividad sobre bacterias resistentes y cepas fúngicas. Además, se le atribuye actividades estimulantes, antioxidantes,
antiinflamatorias, antitumorales, reductoras de peso, entre otras. Los extractos de plantas que presentan actividad biológica deben ser evaluados para determinar su toxicidad y prevenir posibles casos de intoxicación. Por la facilidad de obtención, disponibilidad y bajo costo se utiliza la prueba
de letalidad con Artemia salina como un método preliminar para evaluar la toxicidad de extractos de productos vegetales. El objetivo de este trabajo fue evaluar las propiedades antimicrobianas de extractos de I.paraguariensis St. Hil. sobre cepas de referencia de bacilos gram negativos portadores mecanismos de resistencia como producción de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) y carbapenemasas (MBL y KPC); y realizar ensayos de toxicidad general de los extractos frente a A. salina.

Los extractos etanólicos se obtuvieron a partir de hojas de I. paraguariensis St. Hil. mediante el escaldado y tratamiento a diferentes temperaturas y tiempos: l) 50'C 30 min; 2) 50"C 60 min; 3) 80ºC 30 min; 4) 80ºC 60 min y 5) sin tratamiento (temperatura ambiente durante 1-2 semanas). Las cepas Klebsiella pneumoniae ATCC BAA-2342 Las pruebas de sensibilidad antimicrobiana se realizaron determinando la Dosis Inhibitoria Mínima (DIM) por el método de difusión con discos con un inóculo bacteriano de l,5xl0 UFC mL-l en agar Müeller-Hinton (Britania, Argentina) para todos los extractos de concentraciones finales de 8; 4; 2; l; 0,75;0,5 y 0,25 mg disco-I. Los ensayos se realizaron por triplicado. Para la evaluación de la toxicidad de los extractos se utilizaron nauplios de A. salina. En cada pocillo de una policubeta se colocaron solución salina al l%,los extractos y grupos
de l0 nauplios. Como controles se utilizaron solución salina y dimetil sulfoxido al 5% p/v. Las concentraciones de extractos ensayadas fueron de 2; l;0,5;0,25 mg mL-1. Las pruebas se realizaron por cuadruplicado. La falta total de movimientos durante l0 seg de observación bajo microscopio óptico a un aumento de 40X se estableció como la muerte de los nauplios. La Concentración Letal
Media se obtuvo mediante regresión lineal y los resultados se interpretaron según los criterios de Leos-Rivas y Rivas-Morales. Los extractos etanólicos de I. paraguariensis St. Hil. mostraron actividad animicrobiana frente a P. rettigeri. Los extractos obtenidos en la condición a 80oC 30 min
y sin tratamiento presentaron actividad sobre K pneumoniae ATCC BAA-2342. La DIM presentó mrradi¡ de 2 mg disco-' para los extractos 50ºC 30 min, 50ºC 60 min, 80ºC 60 min y sin tratamiento y de 0,625 mg disco-1 para el extracto 80"C 30'. Sin embargo, frente a K. pneumoniae ATCC 700603
ninguno de los extractos estudiados presentó actividad. La CL50 de los extractos analizados sobre A. salina estuvieron dentro del rango de baja toxicidad. La CL50 del extracto 50ºC 30 min fue de 1,02 mg mL-1 con intervalo de confianza entre 0,85-1,16 mg ml-l; para 50ºC 60 min fue de 1,12 mg mL-1(O,99-1,21 mg ml-1); para 80ºC 30 min fue de l,22 mg ml-l (11,01-l,34mg mL-1); para 80ºC 60 min fue de l,36 mg mL-1(1,02 -1,47 mg mL-1) y para sin tratamiento fue de 1,13 mg mL-1 (0,91-1,27 mg mL-1).
Concluimos que los extractos etanólicos de hojas de I. paraguariensis St. Hil. podrían ser utilizados como alternativa terapéutica debido a que demuestran actividad antimicrobiana frente a dos de las cepas estudiadas (P. rettgeri y K. pneumoniae ATCC BAA-2342) y una baja toxicidad sobre A. salina. Se debe profundizar en estudios farmacológicos y fitoquímicos para obtener resultados
concluyentes.