Trabajo final para obtención de título: Bioquímico/a

Los hongos son organismos ubicuos, que pueden producir enfermedades en el ser humano, estas afecciones se denominan micosis. Dentro de ellas se encuentran las producidas por hongos oportunistas se encuentran las Candidas que producen candidiasis, estas van a llevar el nombre de la localización corporal que infecten, incluidas en estas infecciones, las candidiasis sistémicas que son un gran problema en pacientes inmunodeprimidos, internados y neonatos, porque provocan una alta frecuencia de mortalidad. Uno de los agentes que ha emergido como principal agente causal de candidiasis invasoras, es Candida parapsilosis. Esta levadura forma parte de la flora habitual en la piel del ser humano y puede ser transmitida a través de las manos. Candida parapsilosis en un complejo de tres especies genéticamente diferentes denominadas C. parapsilosis sensu stricto, C. orthopsilosis y C. matapsilosis, las cuales también son diferentes en cuanto a su virulencia y sensibilidad antifúngica. En este sentido es muy importante clasificar a estos agentes en género y especie, siendo substancial para ello tanto la identificación fenotípica clásica, como así también la genotípica, siendo necesario recurrir a técnicas de biología molecular. La región espaciadora transcripta interna (ITS) de ADNr tiene una larga historia de uso como marcador melecular para la identificación a nivel de especie en los estudios ecológicos y taxonómicos de hongos. El objetivo de este trabajo fue caracterizar al complejo C. parapsilosis fenotípicamente y optimizar las técnicas de biología molecular necesarias para posteriormente realizar la identificación molecular en las subespecies del complejo. Esto se llevó a cabo a través de identificación de los aislamientos del cepario de la cátedra de micología de la Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales de la Universidad Nacional de Misiones, con métodos micológicos clásicos, como ser, macromorfología en Agar Glucosado Sabouraud, Agar Hongos y Levaduras y en medio cromogénico CROMagar Candida y micromorfología en Agar Leche al 1%. Se observaron colonias blanquecinas, cremosas en todos los medios y en la observación microscópica se observaron levaduras redondas y ovaladas de 4-5 um con pseudomicelio corto. Para la extracción del material genético se utilizó un protocolo para hongos miceliales lográndose obtener ADN en calidad y cantidad suficientes para ser utilizado posteriormente. Asimismo fue posible estandarizar las condiciones para la amplificación por PCR de la región ITS-5,85-ITS2, siendo necesario utilizar 2,5 mM de Cl2Mg 10ng/ul de ADN templado con una temperatura de hibridación de 58ºC.
Se logró la identificación fenotípica presuntiva y la estandarización de un método fácil, rápido y de relativamente bajo costo para lograr una posterior identificación molecular del complejo y las especies que lo componen y así tener una herramienta para contribuir al diagnóstico preciso para un correcto abordaje terapéutico.